细胞计数是细胞培养过程中的重要步骤,为了解细胞的浓度、数量和活率等信息,实验人员常用台盼蓝染料或AOPI荧光染料对细胞进行染色-计数。
1、台盼蓝染色法
台盼蓝染色是细胞计数中常用的活/死细胞鉴定染色方法之一。
原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,细胞不被染色;而死细胞的胞膜不完整,通透性增加,既死细胞会被染成蓝色,利用台盼蓝染料的特性便可区分活/死细胞。
缺点:
1-台盼蓝对细胞有毒害作用,会致死有损伤的细胞,导致细胞活性检测结果有所偏差;
2-细胞碎片多、杂质多等情况下,无法进行准确计数。
适用细胞种类:培养系细胞。
2、AOPI染色法
当细胞样品中的杂质过多,明场下无法进行准确计数时,我们可以在荧光通道下,用AOPI荧光染料对细胞进行染色。
原理:AOPI荧光染料因其只与DNA和RNA结合的特性——既活细胞呈现绿色,死细胞呈现红色,利用AOPI染色法,可排除杂质对目标细胞的干扰,快速区分活/死细胞。
优点:可排除红细胞、血小板、细胞碎片等杂质对目标细胞的干扰。
缺点:与台盼蓝试剂相比,成本较高。
适用细胞种类:免疫细胞、原代细胞、血液细胞等。
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