您的位置: 首页 > 技术文章 > 实用干货 | 如何进行细胞计数实验?

实用干货 | 如何进行细胞计数实验?

更新时间:2023-06-05浏览:965次

细胞计数是细胞培养过程中的重要步骤,“传统的细胞计数方法"是在显微镜下使用血细胞计数板人工计数。这里博大博聚为大家介绍下传统细胞计数的详细的步骤,供大家参考。


1、准备好血细胞计数板

1)     先用无水乙醇清洁血细胞计数板表面和盖玻片;

2)     再用纯水清洁血细胞计数板表面和盖玻片;

3)     每次清洗后用洗耳球吹干。

4)     在血细胞计数板的计数池上方盖上专用的盖玻片。

注意:最好不要擦拭血细胞计数板的计数池,防止标识线损坏。


2、制备细胞悬液

1)     贴壁生长的细胞,使用胰酶消化的方法使细胞从培养瓶表面脱落;

2)     漩涡混匀或使用移液器反复吹吸细胞悬液,尽量减少细胞团簇;

3)     悬浮细胞则可以直接进行取样计数;

4)     细胞悬液浓度控制在1×106个细胞/mL左右。

注意:

a)      尽量少、尽量小的细胞团簇;

b)     如需计算活率,则需将细胞悬液按照1:1的比例加入等量的0.4%的台盼蓝染料,混匀后,静置1~2分钟。    



3、细胞加样

1)     移液器轻吹细胞悬液使其混合均匀;

2)     将细胞悬液与台盼蓝染料按1:1体积混合均匀;

3)     取出10uL细胞悬液,将细胞悬液滴加于血细胞计数板边缘凹槽处,此时液滴将在虹吸的作用下进入盖玻片下方的计数池。

加样-示意图.jpg


注意:                                              

1)     每次加样前要混匀细胞悬液,防止细胞沉降造成取样误差增大;

2)     加样过程中,要一次性将细胞悬液注入计数室,防止气泡产生,否则要重做;

3)     加样时不要将细胞悬液直接吹入计数池,会造成细胞分布不均匀。



4、 人工细胞计数

计数工具:10X物镜的显微镜、血细胞计数板。

1)     加样后,将血细胞计数板静置数分钟;

2)     把血细胞计数板放置在显微镜的载物台进行观察-计数-记录;

3)     分别计数大方格1-2-3-4中的细胞总数。

血细胞计数板-示意图.jpg


注意:

1)     计数时建议重复1-2次,取平均值,减小计数误差;

2)     四个区域的细胞数量偏差不应超过 5%,否则要重新加样。

3)     对横跨刻度上的细胞,依照“数上不数下,数左不数右"的原则进行计数。

4)    为降低细胞计数误差,浓度最好控制在1×106个细胞/mL左右;

5)     计数时,只计数完整的细胞,如有聚团细胞则按一个细胞进行计数。


5、 血细胞计数板浓度计数标准

(中国的标准:JJG 552-1988血细胞计数板试行检定规程)

细胞计数区域浓度示意图.jpg

1)     如上图所示,当血细胞计数板放上盖玻片后,平台与盖玻片之间的距离 (即高度)为 0.1mm;

2)     平台中心部分各以3mm长,3mm宽精确划分为9个大方格,称为计数室,每个大方格面积为1mm2,体积为 0.1mm3

3)     细胞浓度 (mL)=(四个大方格细胞数之和)/4X2(染液稀释倍数)X 104=?个细胞/mL。


注意:如果不加入台盼蓝染料,则无需乘以2。

 

相信有些小伙伴,即使花费很长时间熟悉,并实际接触细胞计数操作的全部流程后,还是会有结果不满意、人工操作效率低、结果无法一目了然、细胞计数数到“眼疼"的情况。

在这里,我向大家推荐一款博大博聚自主研发的、可以使用标准的血细胞计数板的全自动细胞计数仪!


6、全自动细胞计数仪——JSY-SC-031N型

细胞计数仪-细胞计数板.jpg

全自动细胞计数仪(JSY-SC-031N型)是一款一体式明场细胞计数仪,内置10X光学放大系统、全自动调焦装置、精密的X、Y、Z三轴联动平台、强大的细胞识别算法。

仪器使用标准的血细胞计数板,可实时预览细胞图像,将传统的细胞计数方式可视化、自动化、智能化,为您呈现真实可信的实验结果。


7、血细胞计数板上机实拍图案例

案例1-球藻细胞图.jpg案例3-昆虫细胞图.jpg

案例4-BHK细胞.jpg

8、细胞计数结果包括

总细胞浓度、活/死细胞浓度、活/死细胞比率、总细胞聚团率/浓度、活细胞聚团率/浓度、死细胞聚团率/浓度等计数结果、原始图片、识别图片、柱状图、散点图、等高线图、报告单等…


想了解更多,私信我们~

 

Contact Us
  • QQ:
  • 邮箱:18124609201@163.com
  • 传真:020-31609340
  • 地址:广州黄埔区莱迪科技园

扫一扫  微信咨询

©2024 广州博大博聚科技有限公司 版权所有    备案号:粤ICP备13079967号    技术支持:化工仪器网    Sitemap.xml    总访问量:74281    管理登陆