1、根据待测细菌悬浮液的浓度,加入无菌水进行适当稀释,并计算每个细胞的细菌数量。
2、取一个干净的血细胞计数板,用盖玻片盖住计数区域。
3、摇动细菌悬浮液,用滴管吸一点,从计数板中间平台两侧的凹槽中沿盖玻璃的下边缘滴一小滴,让细菌悬浮液利用液体的表面张力填充计数区域,不要产生气泡,并使用吸水纸从凹槽中吸收过量的细菌悬浮液。细菌悬浮液也可以直接滴到计数区上,然后覆盖玻璃盖。
4、让它静置一段时间,这样细胞就会沉淀在计数板上,不再随液体漂移。将血细胞计数板放在显微镜台上并夹紧。首先在低倍显微镜下找到计数区域,然后切换到高倍显微镜进行观察和计数。由于活细胞的折射率与水的折射率相似,因此在观察过程中应降低光的强度。
5、计数时,如果计数区域由16个中间正方形组成,则按照对角线方向在左上、左下、右上和右下的4个中间正方形中计数细菌数量。如果是由25个中间正方形组成的计数区,除了上述四个中文边外,还需要计算中心一个中间正方形的细菌数量。为了确保计数的准确性,避免重复计数和遗漏,计数期间应对网格线上沉降的细胞的统计有统一的规定。
6、对于芽接酵母,当芽达到母细胞的一半大小时,可以算作两个细胞。对每个样品重复计数2-3次,并根据公式计算每毫升(g)细菌悬浮液的细胞数。
7、测量后,取下盖玻片,用水清洗血细胞计数板。不要用硬物清洗或擦拭,以免损坏格栅秤。洗完后,自己或用吹风机擦干,然后放在盒子里存放。