全自动细胞计数仪的计数方法及其应用分析

　　全自动细胞计数仪的计数方法：
 

　　(1)台盼蓝染色法
 

　　台盼蓝染色是分别计数死亡细胞和活细胞的方法之一。染色的原理是台盼蓝无法穿透活细胞的完整细胞膜，因此活细胞不被染色；然而，死亡细胞的细胞膜被破坏，染料通过细胞膜在细胞中富集，使细胞变蓝。然而，台盼蓝染色可能无法准确区分有核细胞和细胞碎片，因此它倾向于低估细胞总数并高估细胞生存能力。
 

　　(2)荧光细胞计数法
 

　　吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色原理：活细胞通过AO染色发出绿色荧光，而死细胞通过PI染色发出红色荧光。重要的是，对于具有复杂背景的细胞，例如外周血单核细胞，具有更多细胞片段或簇的细胞数量可以避免检测到细胞片段。这种方法最近也被应用于单细胞基因组学，其中绿色对应于完整的细胞，红色对应于成功分离的细胞核。该策略允许研究人员计算未裂解的剩余细胞在细胞总数中的百分比，并计数细胞核以指示样品质量，帮助研究人员确定是否继续单细胞基因组学过程。
 

　　全自动细胞计数仪在单细胞测序中的应用如下：
 

　　单细胞基因组学技术目前正在全面应用，如单细胞RNA测序(scRNA-seq)和染色质转座酶可及性测序(ATAC-seq)。与对大量细胞进行测序的传统方法相比，单细胞基因组学技术突出了细胞之间的差异，这有助于更深入地了解样本材料。例如，scRNA-seq可以比较健康和患病状态的转录谱，而ATAC-seq可以解释染色质的可及性及其对基因表达的影响。
 

　　然而，这些研究都需要对分离的细胞核进行精确计数，因为文库制备需要少量未裂解的细胞，并且样品中没有细胞团块和碎片。此外，许多单细胞基因组学技术需要完整的细胞核才能正常工作。