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全自动细胞计数仪在单细胞测序中的应用

发布时间:2022-05-31浏览:137次

 
  单细胞基因组学技术目前正应用得如火如荼,比如单细胞RNA测序(scRNA-seq)和染色质转座酶可接近性测序(ATAC-seq)。与传统的大量细胞测序方法相比,单细胞基因组学技术突出了细胞之间的差异,有助于更深入地了解样本材料。例如,scRNA-seq能够比较健康和疾病状态下的转录图谱,而ATAC-seq能够说明染色质可接近性及其对基因表达的影响。
 

 

  不过,此类研究都需要对分离的细胞核进行准确计数,因为文库制备的要求是未裂解细胞的数量低,且样本中不含细胞团块和碎片。此外,许多单细胞基因组学技术都需要完整的细胞核才能正常运行。
 
  全自动细胞计数仪采用的方法?
 
  台盼蓝染色法:
 
  台盼蓝染色是常用的对死活细胞进行分别计数的方法之一,染色原理是台盼蓝不能透过活细胞完整的细胞膜,故活细胞不着色;而死亡细胞的细胞膜损伤,染料透过细胞膜在细胞内富集而使细胞着蓝色。不过,台盼蓝染色并不一定能准确分辨有核细胞和细胞碎片,因此它往往低估细胞总数而高估细胞活力。
 
  荧光细胞计数方法:
 
  吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色原理:活细胞经AO染色发出绿色荧光,而死细胞经PI染色发出红色荧光。重要的是,对背景复杂的细胞,比如说外周血单个核细胞,含有细胞碎片较多或成簇的细胞计数,避免了细胞碎片的检测。这种方法最近也应用在单细胞基因组学应用上,其中绿色对应了完整细胞,而红色对应了成功分离的细胞核。这种策略让研究人员能够计算未裂解的残留细胞占总细胞数的百分比,同时对细胞核进行计数,提示样本质量,帮助研究人员确定是否继续进行单细胞基因组学流程。
 

 

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